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domingo, 1 de diciembre de 2024

EXTRACCIÓN DE DNA DE CÉLULAS VEGETALES

 


EXTRACCIÓN DE ADN DE CÉLULAS VEGETALES

Objetivo General

Extraer e identificar el ADN de células vegetales mediante un procedimiento práctico, consolidando conocimientos sobre la estructura y función del material genético.

Objetivos Específicos

  1. Comprender los principios químicos y físicos involucrados en la extracción de ADN.
  2. Aplicar técnicas básicas para la ruptura celular y la purificación del ADN.
  3. Desarrollar habilidades en el manejo de materiales y reactivos de laboratorio.
  4. Visualizar y analizar el ADN extraído utilizando tinción y microscopía.

Introducción

El ADN (ácido desoxirribonucleico) es una molécula esencial que almacena la información genética en todos los organismos vivos. Su estructura de doble hélice, descubierta por Watson y Crick, permite la replicación y transmisión de información genética de generación en generación. La extracción de ADN es un proceso fundamental en la biología molecular que permite estudiar genes, diagnosticar enfermedades y desarrollar aplicaciones biotecnológicas.

En este laboratorio, se extraerá ADN de células vegetales, utilizando materiales comunes y accesibles. El proceso implica la ruptura de la membrana celular para liberar el ADN, seguido de su purificación mediante la eliminación de proteínas y lípidos. Este procedimiento permite comprender la importancia de los componentes químicos involucrados y visualizar el ADN precipitado, consolidando conceptos teóricos mediante la práctica experimental.

Fundamentos Teóricos

El ADN está compuesto por nucleótidos, cada uno formado por una base nitrogenada (adenina, timina, citosina o guanina), un grupo fosfato y una desoxirribosa. Su estructura de doble hélice está estabilizada por enlaces de hidrógeno entre bases complementarias. En células eucariotas, el ADN se organiza en cromosomas dentro del núcleo, mientras que en células procariotas, se encuentra en una molécula circular en el citoplasma.

Para extraer ADN de células vegetales, es necesario romper la pared y la membrana celular, lo cual se logra mediante métodos físicos (trituración) y químicos (uso de detergente). El detergente descompone las membranas celulares al disolver los lípidos, liberando el contenido celular. La sal estabiliza las cargas negativas del ADN, facilitando su precipitación. El alcohol frío es fundamental para precipitar el ADN, ya que reduce la solubilidad de esta molécula en la solución acuosa.

Parte Experimental

Materiales y Reactivos:

  • Guineo maduro y/o tomate (muestra vegetal)
  • Lavavajillas líquido
  • Sal de mesa
  • Alcohol etílico frío
  • Azul de metileno o verde de metilo
  • Agua destilada
  • Microscopio
  • Tubos de ensayo
  • Mortero y mazo
  • Papel de filtro
  • Embudo
  • Vaso de precipitado de 250 mL
  • Pipeta Pasteur
  • Portaobjetos y cubreobjetos

Procedimiento:

  1. Preparación de la muestra: Triturar un guineo maduro o tomate sin cáscara en un mortero.
  2. Solubilización del ADN: Agregar 250 mL de agua destilada y mezclar hasta obtener una suspensión homogénea.
  3. Lisis celular: Mezclar 10 mL de lavavajillas con 0.1 g de sal en un vaso de precipitado y añadir 20 mL de agua destilada. Esta solución rompe las membranas celulares.
  4. Combinar soluciones: Agregar 30 mL del puré de guineo o de tomate a la solución de detergente y sal. Agitar suavemente durante 5-10 minutos.
  5. Filtración: Filtrar la mezcla utilizando papel de filtro para obtener aproximadamente 5 mL de filtrado.
  6. Precipitación del ADN: Enfriar alcohol etílico en un baño de hielo. Agregar lentamente el filtrado al tubo con alcohol frío, formando dos fases.
  7. Observación de la precipitación: Dejar reposar el tubo de ensayo durante 2-3 minutos. Se observarán fibrillas blancas (ADN precipitado) entre las dos capas.
  8. Recolección del ADN: Extraer las fibrillas con una varilla de vidrio.
  9. Tinción: Colocar el ADN en una caja de Petri y teñirlo con azul de metileno o verde de metilo.
  10. Microscopía: Colocar una muestra en un portaobjetos, cubrir con un cubreobjetos y observar bajo el microscopio a 40x y 100x.

Post-Laboratorio

  1. ¿Qué es el ADN y dónde se localiza en las células vegetales?
  2. ¿Qué procesos se llevan a cabo para extraer ADN en este experimento?
  3. ¿Cuál es la función del detergente y la sal en la extracción?
  4. ¿Qué características tiene el ADN precipitado observado?
  5. ¿Qué importancia tiene el ADN en los procesos biológicos?

Referencias Bibliográficas

  1. Universidad Nacional Autónoma de México. (s.f.). Estructura y función del ADN. Recuperado de: UNAM
  2. Prezi. (s.f.). Extracción de ADN de un banano (Musa x paradisiaca). Recuperado de: Prezi
  3. Xunta de Galicia. (s.f.). Ácidos nucleicos. Recuperado de: Xunta Galicia
  4. Universidad Autónoma de Madrid. (s.f.). Extracción de ADN. Recuperado de: UAM

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