EXTRACCIÓN DE ADN DE CÉLULAS
VEGETALES
Objetivo General
Extraer e
identificar el ADN de células vegetales mediante un procedimiento práctico,
consolidando conocimientos sobre la estructura y función del material genético.
Objetivos Específicos
- Comprender los principios químicos y
físicos involucrados en la extracción de ADN.
- Aplicar técnicas básicas para la
ruptura celular y la purificación del ADN.
- Desarrollar habilidades en el manejo de
materiales y reactivos de laboratorio.
- Visualizar y analizar el ADN extraído
utilizando tinción y microscopía.
Introducción
El
ADN (ácido desoxirribonucleico) es una molécula esencial que almacena la
información genética en todos los organismos vivos. Su estructura de doble
hélice, descubierta por Watson y Crick, permite la replicación y transmisión de
información genética de generación en generación. La extracción de ADN es un
proceso fundamental en la biología molecular que permite estudiar genes,
diagnosticar enfermedades y desarrollar aplicaciones biotecnológicas.
En
este laboratorio, se extraerá ADN de células vegetales, utilizando materiales
comunes y accesibles. El proceso implica la ruptura de la membrana celular para
liberar el ADN, seguido de su purificación mediante la eliminación de proteínas
y lípidos. Este procedimiento permite comprender la importancia de los
componentes químicos involucrados y visualizar el ADN precipitado, consolidando
conceptos teóricos mediante la práctica experimental.
Fundamentos Teóricos
El
ADN está compuesto por nucleótidos, cada uno formado por una base nitrogenada
(adenina, timina, citosina o guanina), un grupo fosfato y una desoxirribosa. Su
estructura de doble hélice está estabilizada por enlaces de hidrógeno entre
bases complementarias. En células eucariotas, el ADN se organiza en cromosomas
dentro del núcleo, mientras que en células procariotas, se encuentra en una
molécula circular en el citoplasma.
Para
extraer ADN de células vegetales, es necesario romper la pared y la membrana
celular, lo cual se logra mediante métodos físicos (trituración) y químicos
(uso de detergente). El detergente descompone las membranas celulares al
disolver los lípidos, liberando el contenido celular. La sal estabiliza las
cargas negativas del ADN, facilitando su precipitación. El alcohol frío es
fundamental para precipitar el ADN, ya que reduce la solubilidad de esta
molécula en la solución acuosa.
Parte Experimental
Materiales y Reactivos:
- Guineo maduro y/o tomate (muestra
vegetal)
- Lavavajillas
líquido
- Sal de mesa
- Alcohol etílico
frío
- Azul de metileno o verde de metilo
- Agua destilada
- Microscopio
- Tubos de ensayo
- Mortero y mazo
- Papel de filtro
- Embudo
- Vaso de
precipitado de 250 mL
- Pipeta Pasteur
- Portaobjetos y
cubreobjetos
Procedimiento:
- Preparación de la muestra: Triturar un
guineo maduro o tomate sin cáscara en un mortero.
- Solubilización del ADN: Agregar 250 mL de
agua destilada y mezclar hasta obtener una suspensión homogénea.
- Lisis celular: Mezclar 10 mL de
lavavajillas con 0.1 g de sal en un vaso de precipitado y añadir 20 mL de
agua destilada. Esta solución
rompe las membranas celulares.
- Combinar soluciones: Agregar 30 mL del puré
de guineo o de tomate a la solución de detergente y sal. Agitar suavemente
durante 5-10 minutos.
- Filtración: Filtrar la mezcla utilizando
papel de filtro para obtener aproximadamente 5 mL de filtrado.
- Precipitación del ADN: Enfriar alcohol
etílico en un baño de hielo. Agregar lentamente el filtrado al tubo con
alcohol frío, formando dos fases.
- Observación de la precipitación: Dejar
reposar el tubo de ensayo durante 2-3 minutos. Se observarán fibrillas
blancas (ADN precipitado) entre las dos capas.
- Recolección del ADN: Extraer las fibrillas
con una varilla de vidrio.
- Tinción: Colocar el ADN en una caja de
Petri y teñirlo con azul de metileno o verde de metilo.
- Microscopía: Colocar una muestra en un
portaobjetos, cubrir con un cubreobjetos y observar bajo el microscopio a
40x y 100x.
Post-Laboratorio
- ¿Qué es el ADN y dónde se localiza en
las células vegetales?
- ¿Qué procesos se llevan a cabo para
extraer ADN en este experimento?
- ¿Cuál es la función del detergente y la
sal en la extracción?
- ¿Qué características tiene el ADN
precipitado observado?
- ¿Qué importancia tiene el ADN en los
procesos biológicos?
Referencias Bibliográficas
- Universidad Nacional Autónoma de
México. (s.f.). Estructura y función del ADN. Recuperado de: UNAM
- Prezi. (s.f.). Extracción de ADN de
un banano (Musa x paradisiaca). Recuperado de: Prezi
- Xunta de Galicia. (s.f.). Ácidos
nucleicos. Recuperado de:
Xunta Galicia
- Universidad Autónoma de Madrid. (s.f.).
Extracción de ADN. Recuperado
de: UAM
